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关于明胶酶谱法试剂盒脱色液配方的注意事项

发布时间:2017-05-31 14:19:58 浏览人数:

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关于明胶酶谱法试剂盒脱色液配方的注意事项
本公司销售的基质金属蛋白酶MMP2/MMP9明胶酶谱试剂盒,其中脱色液配方:冰醋酸:甲小型冷热冲击试验机醇:水=7:5:88(V:V:V),很多老师不明年这里面的冰醋酸是甚么,我们今印花牢度水洗试验机天给大家讲授1下。
这个冰醋酸不是醋酸也不是乙酸,冰醋酸也叫冰乙酸,就是纯的无水乙酸。不过我们选择常规的98%乙酸也是可以的。

检测步骤:
1. 制备含 MMP 底物蛋白的 SDS-PAGE 凝胶:推荐分离胶浓度为 8%。依照标准程序制备 SDS- PAGE 凝胶。将 10 ×液晶数显式万电磁振动台缩水率试验机电磁振动试验机能试验机; substrate G 熔化,并 90 ºC 加热 5 分钟。分别在浓缩胶和分离胶中额外加 入 10 × substrate G 并使ya1000b压力试验机之稀释 10 倍,混匀后加入过硫酸铵和 TEMED,等待凝胶聚合。
2. 待测样品 1:1 稀释于 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer (用完后可自行配制:4%电线扭结试验机 SDS, 100 mM Tris-Cl耐光耐候试验机 pH6.8, 20%安全鞋国标耐折试验机 glycerol, 0.02% bromophno静力试验机l blue),混合后直接上样。切大电流起弧试验机勿加热变性,并且仅 使用不加还原剂的上样缓冲液。可通过预实验肯定加样量,使用普通蛋床垫综合试验机白预染 Marker便可。阳 性对比(可选步骤):可取人、小鼠、大鼠或兔 100µl 全血与 100&钻杆扭矩试验机micro;l 2 × SDS-PAGE no包装斜面冲击试验机n-
reducing buffer 等体积混合,取 5⑴5µl 上样。
3. 低电流恒流电泳,每块小胶电流为 20m热循环试验机A/gel。溴酚蓝跑出凝胶前沿时结束电泳。
4. 洗涤凝胶:取出凝胶,去除浓缩胶,放入容器内.可先用适当蒸馏水冲洗凝胶,然后加入10ml
1× Buffer A(用蒸馏水稀释),室温漂洗凝胶 2 × 30 分钟。中间换液。
5. 孵育:倒掉 Buffer A。加入 10 ml 1× Buffer B(蒸馏水稀释),室温或 37ºC 孵育 1~5 小时。阳性 楔压强度试验机对 拉链综合强力试验散热器水压试验机机照或血中的 MMP 通常 37ºC 孵育插头引线弯曲试验机 1 小时便可显示。如 MMP 活性低,应延长孵育时间为 10 小时或 过1夜。
6. 显色:倒掉 Buffer B,加入 SD冷热冲击试验机S-PAGE 凝胶蛋白质考马斯亮蓝染色液(操作步骤见 SDS-PAGE 凝纤维材料拉力试验机 催化剂试验机胶蛋白质考马斯亮蓝染色液说明书)。凝胶的大部份区域被深染,在有 MMP 条带的位置 不被染 色而构成透亮区域。透明区域的位置和范围唆使 MMP⑵、MMP⑼ 的大小位置(酶谱)及 活性。阳 性对比将在 66~72 (MMP⑵)、92 (MMP⑼)、130 (proMMP⑼)、225 (proMMP⑼) 慢应变速率应力腐蚀拉伸试验机kDa 位置出现透明条带。
7. 条带扫描:将凝胶放在扫描仪上扫描。虽30吨电子万能试验机然 MMP 条带透明,但凝胶背景并不是真正全黑。解决 办法:可用非透射光扫描,或用软件图象处理程序调剂背景显示为灰度显示,并尽可能设置为黑色.MMP条带则为白色,这类背景黑条带白的格式是英文论文中最多见的格式。
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